肝微粒體、肝S9、肝胞質(zhì)液與體外藥物代謝

藥物代謝研究是創(chuàng)新藥物研發(fā)的重要內(nèi)容，它不僅決定了創(chuàng)新藥物制劑研發(fā)的成敗，而且與創(chuàng)新藥物研發(fā)的速度和質(zhì)量有密切關(guān)系。由于肝臟是藥物代謝的主要場(chǎng)所，體外代謝模型多以肝臟為基礎(chǔ)。

1    什么是藥物代謝？

臨床前研究是新藥研發(fā)中必要的環(huán)節(jié)，而藥物代謝動(dòng)力學(xué)是臨床前藥理評(píng)價(jià)的重要組成部分。藥物被機(jī)體吸收后，在體內(nèi)各種酶以及體液環(huán)境作用下發(fā)生化學(xué)結(jié)構(gòu)改變的過(guò)程成為藥物代謝（Drug Metabolism），又稱生物轉(zhuǎn)化（Biotransformation）。藥物代謝主要在肝中進(jìn)行，也發(fā)生在腸、腎、肺、血液和皮膚等器官。藥物在體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化，分為Ⅰ相代謝反應(yīng)和Ⅱ相代謝反應(yīng)。藥物分子上引入新的基團(tuán)或除去原有小基團(tuán)的官能團(tuán)反應(yīng)稱為Ⅰ相代謝，包括氧化、還原和水解等反應(yīng)。藥物或Ⅰ相代謝產(chǎn)物與體內(nèi)某些內(nèi)源性小分子結(jié)合的反應(yīng)為Ⅱ相代謝，亦稱為結(jié)合反應(yīng)，如葡萄糖醛酸結(jié)合、磷酸化、甲基化、乙酰化、谷胱甘肽結(jié)合等反應(yīng)。多數(shù)親脂性的藥物吸收后，經(jīng)Ⅰ相代謝可變?yōu)闃O性和水溶性較高的代謝產(chǎn)物，有利于Ⅱ相代謝的進(jìn)行而增加極性。Ⅱ相代謝是真正的“解毒"途徑，其代謝產(chǎn)物通常具有更好的水溶性，更易經(jīng)尿液和膽汁排出體外。

2    肝亞細(xì)胞模型在藥物體外研究中的應(yīng)用

藥物生物轉(zhuǎn)化中的一個(gè)關(guān)鍵且復(fù)雜的問(wèn)題是如何將體外研究的結(jié)果進(jìn)行外推，建立體內(nèi)-體外的相關(guān)性，從而預(yù)測(cè)藥物在人體內(nèi)的代謝行為，進(jìn)而預(yù)測(cè)藥物的有效性和安全性。要相對(duì)準(zhǔn)確的進(jìn)行此類預(yù)測(cè)工作，合理的體外研究模型的選擇非常關(guān)鍵。肝亞細(xì)胞模型如肝微粒體（Liver Microsomes）、肝S9（Liver S9 Fractions）、肝胞質(zhì)液（Liver Cytosol）因其應(yīng)用操作簡(jiǎn)單、價(jià)格合理、儲(chǔ)存方便，在藥物代謝的初期篩選方面得到了廣泛應(yīng)用。

表1 不同肝亞細(xì)胞模型的優(yōu)缺點(diǎn)和應(yīng)用

2.1 肝微粒體（Liver Microsomes）

肝微粒體是指肝組織在勻漿和差速離心過(guò)程中獲得的由破碎的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)自我融合形成的近似球形的膜囊泡狀結(jié)構(gòu)，包含了CYP450酶和一些Ⅱ相酶，如UGTs、ST等。肝微粒體用于CYP450酶研究時(shí)，只需要加入NADPH或NADPH的再生系統(tǒng)即可啟動(dòng)反應(yīng)。對(duì)于UGT酶活性的研究，則需加入尿苷二磷酸葡萄糖（UDPGA）和丙甲菌素啟動(dòng)反應(yīng)。

由于肝微粒體是Ⅰ相代謝酶的主要來(lái)源，故肝微粒體在體外藥物代謝研究中被廣泛使用。肝微粒體不但可以為系統(tǒng)的藥物代謝提供定性的信息，而且可以在藥物研發(fā)過(guò)程中用于大量化合物代謝穩(wěn)定性的篩選及優(yōu)化，同時(shí)可以用于評(píng)價(jià)潛在的藥物藥物相互作用。

2.2 肝S9（Liver S9 Fraction）

肝臟S9是肝組織去除勻漿沉淀物后的含有代謝所需成分、具有完整代謝功能的混懸溶液。相對(duì)于微粒體和胞質(zhì)液，S9包含了完整的I相和Ⅱ相代謝酶的活性，能更完整地用于藥物的代謝輪廓研究。

有的藥物經(jīng)過(guò)I相代謝后又經(jīng)過(guò)Ⅱ相代謝，形成一些特定的代謝產(chǎn)物，這樣的代謝產(chǎn)物往往在微粒體或胞質(zhì)液的體系中不容易被發(fā)現(xiàn)。因S9具有完整的酶系，可以用于代謝產(chǎn)物系統(tǒng)的定性研究。由于該系統(tǒng)中代謝酶活性相對(duì)于微粒體和胞質(zhì)液低，代謝產(chǎn)物的形成量也很少，往往不容易被檢測(cè)到。同時(shí)，因該體系中含有大量的脂類物質(zhì)和其它蛋白質(zhì)，容易降低藥物的游離程度，從而使實(shí)驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。

2.3 肝胞質(zhì)液（Cytosol）

肝胞質(zhì)液包含了可溶性的Ⅱ相代謝酶，如NAT、GST、ST、TPMT等，在很多化療藥物的激活與解毒過(guò)程中發(fā)揮重要作用。與I相酶一樣，Ⅱ相酶發(fā)生代謝反應(yīng)同樣也需要外源性的輔酶來(lái)催化。例如，NAT需要乙酰輔酶A(acetyl CoA)、二硫蘇糖醇（DTT）和乙酰輔酶A的再生系統(tǒng)來(lái)催化；ST需要腺苷-3’-磷酸-5’-磷酰硫酸（PAPS）來(lái)催化；GST需要谷胱甘肽來(lái)催化。由于該體系中只有Ⅱ相代謝酶存在，且相對(duì)于肝S9來(lái)講酶活還很高，因此可通過(guò)加入不同的輔酶來(lái)單獨(dú)研究某個(gè)亞型酶的代謝。

3    IPHASE產(chǎn)品及優(yōu)勢(shì)

IPHASE憑借先進(jìn)的設(shè)備、專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)的經(jīng)驗(yàn)，開(kāi)發(fā)出了不同種屬動(dòng)物的肝微粒體、肝S9、肝胞質(zhì)液等產(chǎn)品，助力于藥物的體外代謝研究。

l  酶活高

酶活可對(duì)標(biāo)或高于同類進(jìn)口產(chǎn)品

l  批量生產(chǎn)

采用批量生產(chǎn)方式，庫(kù)充充足，可保證同一批次產(chǎn)品的供應(yīng)

l  貨期短

國(guó)內(nèi)現(xiàn)貨，保障客戶使用需求

l  售后服務(wù)機(jī)制健全

有專業(yè)技術(shù)人員提供全面服務(wù)

l  可定制

可提供特定物種、特定模型和特定年齡等非常規(guī)樣品的定制服務(wù)

圖2 某藥物在不同種屬動(dòng)物肝微粒體中的I相代謝穩(wěn)定性

圖3某藥物在人肝微粒中的代謝抑制率

表2 IPHASE肝微粒體（Liver Microsomes）

表3 IPHASE肝S9（Liver S9 Fractions）

表4 IPHASE肝胞質(zhì)液（Liver Cytosol）

IPHASE/匯智和源憑借多年的研發(fā)經(jīng)驗(yàn)，推出了多領(lǐng)域、多種類的科研試劑，為藥物早期研發(fā)提供篩選工具，為生命科學(xué)領(lǐng)域的探索提供新材料、新方法和新手段，為食品、藥品、化學(xué)品等的遺傳毒性研究提供便捷產(chǎn)品，望廣大科研工作者咨詢。

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