平衡透析法測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率原理及裝置

藥物血漿蛋白結(jié)合率（plasma protein binding, PPB）是藥物在動(dòng)物體內(nèi)重要的藥理學(xué)參數(shù)之一，影響著藥物體內(nèi)游離濃度進(jìn)而影響藥物的處置過程。藥物在進(jìn)入血液后與血漿蛋白會(huì)有不同程度結(jié)合，血液中游離藥物的比例會(huì)影響其在體內(nèi)吸收、分布、代謝和排泄的過程，與血漿蛋白結(jié)合的藥物可能會(huì)有更長(zhǎng)的半衰期和清除速率，因此測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率對(duì)于理解化合物的活性以及組織分布有很重要的參考意義。
1 結(jié)合蛋白類型
血漿蛋白主要作為載體負(fù)責(zé)各類外源性和內(nèi)源性分子在循環(huán)系統(tǒng)內(nèi)的轉(zhuǎn)運(yùn)。其中參與小分子藥物結(jié)合的主要有白蛋白、α-1-酸性糖蛋白（AAG）、球蛋白和脂蛋白，主要以白蛋白和AAG為主。藥物與蛋白的結(jié)合強(qiáng)弱主要與藥物-蛋白親和力、蛋白豐度相關(guān)。


2 血漿蛋白結(jié)合率常用測(cè)定方法
目前常用于PPB測(cè)定的方法主要包括平衡透析法（equilibrium dialysis），超濾法（utrafiltration method），超速離心法（ultracentrifugation method），凝膠過濾法（gel filtration）等。 其中，平衡透析法是基于藥物結(jié)合的平衡原理來測(cè)定藥物游離濃度的方法，也是研究藥物血漿蛋白結(jié)合率的經(jīng)典方法。

平衡透析法
常用種屬：大鼠，小鼠，犬，猴，人
分析方法：LC-MS/MS

各種藥物以一定的比率與血漿蛋白結(jié)合之后，在血漿中會(huì)同時(shí)存在結(jié)合型與游離型兩種類型，游離性藥物具有藥物活性。藥物與血漿蛋白結(jié)合會(huì)成為結(jié)合型藥物，暫時(shí)失去藥理活性，并且儲(chǔ)存于血液中，起到藥庫(kù)的作用，對(duì)于藥物作用及其維持時(shí)間長(zhǎng)短具有重要的意義。一般蛋白結(jié)合率高的藥物體內(nèi)消除慢，作用維持時(shí)間長(zhǎng)，藥效平穩(wěn)。結(jié)合率低的藥物體內(nèi)消除快，同時(shí)作用時(shí)間短，藥效有很大的波動(dòng)。

平衡透析法測(cè)定血漿蛋白結(jié)合率是用透析膜將蛋白質(zhì)溶液與緩沖液分隔開，建立在兩者之間的一種平衡狀態(tài)，只有分子量小的藥物小分子可以通過。透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓，擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度與膜的厚度、透析的小分子溶質(zhì)在膜兩邊的濃度梯度及透析溫度等因素有關(guān)。平衡透析法能夠直接測(cè)出為與蛋白結(jié)合的藥物小分子的數(shù)量，這是分析蛋白與小分子物質(zhì)結(jié)合的關(guān)鍵，從而能夠求出結(jié)合位點(diǎn)數(shù)及結(jié)合常數(shù)。

如圖所示，利用半透膜將左右兩室進(jìn)行分隔，左側(cè)加入含藥的蛋白溶液，右側(cè)加入空白緩沖液，未被結(jié)合的游離藥物可以自由穿過半透膜，孵育一定時(shí)間后兩側(cè)達(dá)到平衡，游離藥物濃度相等，通過測(cè)定兩側(cè)藥物濃度即可計(jì)算得到血漿蛋白結(jié)合率。

平衡透析法在測(cè)定藥物血漿蛋白結(jié)合率具有操作簡(jiǎn)單、溫度易于控制、PH值可調(diào)、設(shè)備成本低廉等優(yōu)點(diǎn)。但是同時(shí)存在達(dá)成平衡時(shí)間較長(zhǎng)、溶液體積會(huì)變化，且透析時(shí)間過長(zhǎng)可能會(huì)造成由加熱或代謝引起的被測(cè)物質(zhì)的降解等缺點(diǎn)。因此在利用平衡透析法測(cè)定藥物血漿蛋白結(jié)合率，或者藥物與蛋白質(zhì)相互作用時(shí)需要與其他的一些方法聯(lián)用，才能獲得更準(zhǔn)確的作用信息。一般只有血漿蛋白結(jié)合率高，分布容積小，消除慢以及治療指數(shù)低的藥物在臨床上的這種相互作用才有意義。

3 血漿蛋白結(jié)合平衡透析裝置
    匯智泰康針對(duì)血漿蛋白結(jié)合率測(cè)定試驗(yàn)研發(fā)針對(duì)性的平衡透析裝置，基于平衡透析法的原理而設(shè)計(jì)96孔平衡透析裝置，可用于血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定。該裝置能夠減少非特異性的透析設(shè)備表面的藥物吸附，縮短平衡時(shí)間，提高樣品分析的通量。透析膜（半透膜）選用高分子膜，孔徑可根據(jù)客戶需求定制。

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